微量蛋白三种除菌方法的比较

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2022-11-26      环球过滤分离技术网      guolvfenlitech6



      在组 织 培 养 中， 常需 用 到 微 量特异 的无 菌 蛋 白， 一 些来源稀 少， 价 格 昂贵 的蛋 白， 一 经 除菌 损 失近 半， 甚 为可惜 所 以 寻 找 一 种 除菌 效果好， 蛋 白得率 高 的 除 菌方法 尤为重 要 以 往通 常 采 用 0.22um微孔 纤 维 素滤 膜 过 滤 除菌， 但 由于 纤 维 素滤 膜 的 非特异性 吸 附， 使 得 蛋 白在 除菌过 程 中损 失较 多 我 们根 据 以 往 经验， 采用单纯 滤 膜过滤 除菌 加1mg/ml 牛血清白蛋白(BSA)， 再 用 滤 膜过 滤除菌和 高速 离 心 除菌三 种方法， 对 蛋 白进 行 除菌 试 验， 并对 蛋 白损失率和 除菌效果进行 比较， 以 期 建立 一 种 除菌效果好、 蛋 白得率高 的微量蛋 白除菌方法
一、材 料和方法
     以 鼠正 常红 细 胞 超 声破 碎后 的可溶性提取物为待除菌蛋 白， 分 为三组， 每组 第一组 直接用 滤 膜 过 滤 第 二 组 在 待 除 菌 蛋 白 中按 加 入后， 再用滤 膜过滤 并 以 单独用 滤 膜过滤 除 菌 作 为 对 照 第 三 组 于 4℃ 15000r/min离心30min,各组实验同时进行.     蛋白含量用53型紫外分光光度计测定.
       用除菌前的蛋白量减去除菌后的蛋白量，再除以除菌前的蛋白量计算其除菌后。 蛋白损失率。 除菌后， 在 无菌条 件 下 取 样， 用RPMI1640 和 肉汤培 养基 做 无 菌 试 验，观察除菌效果结果三种除菌方法蛋白损失和除菌率。

二、结果

见表1,三 种除菌方法的蛋白损失和除菌率的比较 .



三、讨论

      目前 多数 实验 室 应 用 组 织 培 养技 术， 而 且 常 用少 量 特 异性 蛋 白刺激 细 胞， 以 观察实验结 果 这就 要 求有一种较 为理 想 的既能除菌又 能减少蛋 白损失 的微量 蛋 白除菌方 法
      目前常用的0.22um微孔滤 膜 除菌方 法， 蛋白损失 较 大， 不 宜 用 于 微 量 蛋 白的 除 菌 而 细 菌 的体 积 微 小，一般 以 um 计算， 小球 菌直径 只有0.1um左 右， 小杆菌长0.7~1.5um， 宽 0.2~0.4um ， 所 以 我 们采用0.15um微孔滤膜过滤除菌， 以保证除菌效果.

      我 们采用 三 种方法， 对 除菌效果 和 蛋 白损 失率进 行 了比 较 从 结 果 可 以 看 出， 高速 离 心 法 蛋 白损 失少， 但 除 菌效果不佳 直接 用滤 膜和 加1mg/mlBSA后,再用滤膜过滤除菌， 除菌效果 好， 但前 一种 方 法 蛋 白损 失较大， 不宜采用， 而 后 一 种方 法 不 但除菌效 果好， 而 且 蛋 白损 失少 在组 织 培 养 中必 须 补 加血 清， 通 常采用 小 牛血 清， 为其 中的一 种成分， 因此， 加入BSA 后， 不 会影 响细胞 生长及培 养结果 在待除菌蛋 白中按 加入 后再用滤 膜 除菌， 是 一 种较 为理 想的微量蛋 白除菌方 法 现 在美国 公 司 已 生产 出一种低 吸 附性滤 膜， 国 内尚无此产 品 出现 目前对 这种滤 膜的使用效果还未 见报道 有待于今后 进一步研究探讨

参考文献
房益兰 主编 医学 微 生物学及 免疫学 西安 天 则 出版社，
余 贺主编 中国 医学 百 科 全书 微生 物学 上海 上海科学技术出版社  
鄂征 主编 组织培 养技术 北京 人 民卫 生 出版社

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