深层过滤去除免疫球蛋白制剂中的朊病毒蛋白

2023-11-6 06:06| 发布者: guolvfenlitech7| 查看: 68| 评论: 0|原作者: guolvfenlitech6

摘要: 2023-11-06 环球过滤分离技术网 guolvfenlitech6 深层过滤去除免疫球蛋白制剂中的朊病毒蛋白白［英］／Van Holten RW …∥Vox Sang．-2003，85（1）．-20～24 深层过滤是血液制品和其他生物制品生 ...

2023-11-06       环球过滤分离技术网             guolvfenlitech7

深层过滤去除免疫球蛋白制剂中的朊病毒蛋白

白［英］／Van Holten RW …∥Vox Sang．-2003，85（1）．-20～24

   深层过滤是血液制品和其他生物制品生产过程中常用的方法。有研究显示深层过滤可有效去除溶液中有潜在污染危险的异常朊病毒蛋白（ PrPsc）。作者将感染朊病毒蛋白的仓鼠脑组织经匀浆、超声处理后，再通过0.45μm、0．22μm、0．1μm 滤膜依次过滤，制备成羊瘙痒症脑组织匀浆（ SBH），按比例（1∶51）加入到用于制备 Rh0（ D）免疫球蛋白的上清Ⅲ（ SⅢ）组分（ Cohn-Onley 法制备）中，在同样的生产条件下经深层过滤后，采用高渗 NaCl 溶液从滤膜上洗脱 PrPsc，通过蛋白印迹法对滤液及洗脱液中的 PrPsc进行定量检测，以评价生产过程中深层过滤法去除PrPsc的能力。

      试验共分为三组，（1） SBH 与 SⅢ的混合物直接进行深层过滤；（2） SBH 与 SⅢ的混合物在深层过滤前先用0．22μm 醋酸纤维素膜过滤；（3） SBH 与 T ris 缓冲液（ T BS）的混合物进行深层过滤。过滤后均分别用1M 、2MNaCl 溶液清洗滤膜。并于过滤前〔试验（2）加取用0．22μm 膜过滤后样品〕、深层过滤的前段、中段、后段以及用1M 、2M NaCl 清洗滤膜后取样，样品进行1／2log 系列稀释后通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白印迹法，定量检测其中的 PrPsc的含量。

      结果显示，单用深层过滤可使滤液中的PrPsc含量下降3．3log 以上；
用高盐溶液可从滤膜上洗脱近32％的 PrPsc；深层过滤前采用0．22μm 膜过滤可使滤液中的 PrPsc含量降至不可检出水平；深层过滤几乎不能去除SBH 与 T BS 混合液中的 PrPsc。

   深层过滤的工作原理分为机械过滤和动电吸附，大于0．1μm 的颗粒可通过机械过滤去除，而小于0．1μm 的颗粒在低 pH 条件下带负电荷，可被带正电荷的滤膜基质吸附，这也为高盐清洗的结果所证实。试验（2）说明 SBH 加入到含有微量甲醇的SⅢ中会形成沉淀被滤膜去除，而试验（3）则反映出深层过滤不能截留蛋白。在低pH 条件下吸附作用可能会更强，其他因素如蛋白浓度、离子强度等都会影响深层过滤从缓冲液中去除PrPsc的能力。

   作者认为单用深层过滤不能有效去除PrPsc，但如果结合预沉淀等步骤则很有效。（何薇摘李秀玲校）

来源于：网络，侵权告删          www.guolvfenlitech.com

鲜花

握手

雷人

路过

鸡蛋

收藏分享邀请

上一篇：灭活疫苗下游工艺概述下一篇：凝胶过滤层析参数对EV71病毒粗提液分离效果的影响

深层过滤去除免疫球蛋白制剂中的朊病毒蛋白

相关分类