细菌内毒素检查法

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2022-10-28 环球过滤分离技术网   guolvfenlitech1



热原主要是细菌释放的一种内毒素，热原进入机体血液循环系统会引起发热等一系列不良反应，因此，注射剂热原或细菌内毒素检查是保证注射剂安全性的重要质量指标。

一，定义

细菌内毒素检查法是判断供试品中细菌内毒素是否符合规定。 内毒素(Endotoxin)即革兰氏阴性菌细胞壁的脂多糖，其毒性成分为类脂A。菌体死亡崩解后释放出来。细菌内毒素检查包括两种方法，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法。供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。

二，正常值

体内菌群的种类和比例正常，人体处于动态平衡。

三，临床意义

热原主要是细菌释放的一种内毒素，热原进入机体血液循环系统会引起发热等一系列不良反应，因此，注射剂热原或细菌内毒素检查是保证注射剂安全性的重要质量指标。　异常结果：临床上在进行静脉滴注大量输液时，由于药液中含有热原，病人在0.5-1h内出现冷颤、高热、出汗、昏晕、呕吐等症状，高热时体温可达40℃，严重者甚至可休克。

（1）细菌内毒素标准品为基准物进行标定，确定基重量的相当效价。每1mg工作标准品效价应不小于2EU，不大于50EU，并具备均一性和稳定性的实验数据。效价测定方法如下：每批工作标准品至少取4支样品，使用同一批号鲎试剂、同1支标准品。

      每支工作标准品按重量、标准品按单位，分别用内毒素检查用水稀释制备一系列2倍稀释度的内毒素溶液，与鲎试剂反应，当4支工作标准品的反应终点的对数均值的标准差(S)小于0.365时，计算4支工作标准品的反应终点的几何平均值(以ng/mg表示)及标准品的反应终点值以(以EU/mg表示)，按下式计算。

（2）试验准备 本法所用的器皿需经处理，除去可能存在的外源性内毒素常用250℃干烤30分钟或180℃干烤2小时，也可用其他适宜方法。试验操作过程应防止微生物的污染。试验前需核对使用批号鲎试剂的灵敏度标示值，应符合规定。装量加入配带的鲎试剂溶剂。溶解后，为鲎试剂溶液，备用。

     供试品的稀释：使用批号鲎试剂的灵敏度标示值小于供试品的内毒限量时，按下式计算，用内毒素检查用水将供试剂品稀释后进行检查。　供试品的稀释倍数=X/λ　X：供试品的内毒素限量内毒素限量(EU/ml)　λ：供试品鲎度剂灵敏度标示值(EU/ml)

（3）检查装有0.1ml鲎试剂溶液的10×75mm试管(或0.1ml/支规格的鲎试剂原安瓿)4支，其中2支加入0.1ml供试品作为试品管，1支加入2λ内毒素工作标准品0.1ml作为阳性对照管，1支加入配带的鲎试剂溶液0.1ml作为阴性对照管。将试管轻轻混匀后，封闭管口，垂直放入37±1℃水浴中，保温60±2分钟。保温过程和拿取试管要小心，避免因受到振动造成阴性结果。

（4）结果判断 将试管从水浴中轻轻取出，缓缓倒转1800时，管内凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性记录为(+)凝胶不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性，记录为(-)。

    供试品2管如为(-)，应认为符合规定，不再进行热原检查法(家兔法)试验。如2管均为(+)，应认为不符合规定。如2管中1管为(+)，1管为(-)，按述方法另取4支供试品管复试，4管中有1管为(+)即认为不符合规定。除正文另有规定外，有符合规定的供试品应再以热原检查法(家兔法)试验，并根据的结果判定。供试品细菌内毒素的限量应符合各品种正文下的规定。阳性对照为(-)或阴性对照(+)，试验无效。

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